Good’s緩沖液是一類專用于生命科學(xué)研究的緩沖體系,其不參加和不干擾生物化學(xué)過程。下面我們介紹兩種常用的Good’s緩沖劑PIPES和HEPES。
PIPES

PIPES的pH緩沖范圍是6.1-7.5,不溶于水,溶于NaOH水溶液。PIPES不同于含二(2-羥乙基)氨基基團(tuán)的緩沖劑(如Bis-tris,Bicine),與多數(shù)金屬離子不能形成穩(wěn)定配合物,適用于含有金屬離子的溶液體系中的緩沖劑。根據(jù)已有的研究結(jié)果,PIPES可被應(yīng)用于使用磷酸纖維素色譜純化微管蛋白,用于凝膠過濾法純化重組GTP結(jié)合蛋白ARF1和ARF2,作為緩沖液從大腸桿菌中結(jié)晶轉(zhuǎn)酮酶。另外,由于PIPES能形成自由基,因此不適合應(yīng)用于氧化還原體系。在陽離子交換色譜法,應(yīng)當(dāng)使用低濃度的PIPES緩沖液,這是因?yàn)镻IPES具有相對(duì)較大的離子強(qiáng)度,而且其pKa值具有濃度依賴性。
HEPES

HEPES的pH緩沖范圍是6.8-8.2,溶于水,不與金屬離子形成穩(wěn)定的配合物,多數(shù)情況下,不會(huì)干擾生物化學(xué)過程,HEPES常用于各種類型生物體的細(xì)胞培養(yǎng)基中;在蛋白質(zhì)研究中,PIPES常用作陽離子交換色譜法中結(jié)合緩沖液的組分和洗脫液;在DNA研究中,PIPES用作磷酸鈣和DNA沉淀物形成體系的緩沖液,AFM以及電穿孔實(shí)驗(yàn)中的緩沖液。另外,HEPES對(duì)DNA和限制酶之間的反應(yīng)有一定干擾,也不適合用于Lowry氏法測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
綜上所述,PIPES和HEPS均屬于Good’s緩沖劑,都不能和金屬離子形成穩(wěn)定的配合物,適合于含有金屬離子的溶液體系。但它們之間也具有一定的差異性,溶解性方面,PIPES不溶于水,而HEPES具有良好的水溶性;緩沖范圍方面,PIPES偏酸性到中性,HEPES偏中性到堿性,這主要是由于兩者的結(jié)構(gòu)差異決定的,PIPES有兩個(gè)磺酸基,HEPES含有一個(gè)磺酸基和羥基。另外,PIPES和HEPES在某些體系應(yīng)用中有一定限制。因此,我們?cè)谶x擇上述緩沖劑的時(shí)候,需要綜合考慮實(shí)驗(yàn)體系的適合性以及兩者性質(zhì)的差異性。
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